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點擊次數(shù):15 發(fā)布時間:2024/8/14 10:11:05
1、問:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實驗了。
2、問:四季青胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以保存血清中的生長因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉染細胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合,影響轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞,病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活!這要根據(jù)實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
5、問:(1)我買的是杭州四季青的新生牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關系嗎?
答:關于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,因為有兩個作用是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。
在實驗室處理血清的時候,水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,溫度升高到80℃,血清變成了凝膠狀,重新處理另外一份血清,將兩份血清對比,發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上,肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。熱滅活之后,血清放在四度冰箱久了,就會有沉淀產(chǎn)生,這常常會被認為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到底有沒有污染,常常又會把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會進一步析出,還是要做鏡檢,無菌培養(yǎng)試驗,和革蘭氏染色試驗,非常麻煩。
有資料顯示,里面提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中*常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的必要性。有人比較過11個不同細胞株,發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細胞,MRC-5)的生長帶來負面影響,三個細胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而只有兩個細胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之后,細胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。
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